有一个制剂产品标准,里面有一项是微生物限度,求高人根据标准写出微生物方法学验证方案和具体的试验过程。具体要求同CTD申报资料的P5模块。
制剂产品标准如下:
微生物限度 取本品10g,加入无菌聚山梨酯80(预加热至40℃~45℃)5g,混匀,再加入冲洗液(预加热至40℃~45℃)85ml,混匀,作为供试品溶液(1),量取供试品溶液(1)10ml,加中和剂90ml,混匀,静置20分钟,作为供试品溶液(2)。
需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数 用冲洗液(预加热至40℃~45℃)50ml冲洗滤膜,取供试品溶液(2)10ml(相当于供试品0.1g),薄膜过滤,用冲洗液(预加热至40℃~45℃)冲洗滤膜3次,每次100ml。分别取以上滤膜,照非无菌产品微生物限度检查:微生物计数法(现行中国兽药典附录1105)检查。
金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌 用冲洗液(预加热至40℃~45℃)50ml冲洗滤膜,取供试品溶液(1)10ml(相当于供试品1g),薄膜过滤,用冲洗液(预加热至40℃~45℃)冲洗滤膜3次,每次100ml。分别取以上滤膜,照非无菌产品微生物限度检查:控制菌检查法(现行中国兽药典附录1106)检查。
每1g供试品中需氧菌总数不得过102cfu,霉菌和酵母菌总数不得过101cfu,不得检出金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌。
附注:
1.冲洗液
磷酸二氢钾 | 3.60g | 磷酸氢二钠二水合物 | 7.20g |
氯化钠 | 4.30g | 肉蛋白胨或酪蛋白胨 | 1.00g |
聚山梨酯80 | 10.00g | 水 | 1000ml |
pH:7.0±0.2,25℃ |
2.中和剂
聚山梨酯80 | 30.00g | 蛋黄卵磷脂 | 3.00g |
盐酸组氨酸 | 1.00g | 肉蛋白胨或酪蛋白胨 | 1.00g |
氯化钠 | 4.30g | 磷酸二氢钾 | 3.60g |
磷酸氢二钠二水合物 | 7.20g | 水 | 1000ml |
pH:7.0±0.2,25℃ |
3.磷酸盐缓冲液(pH8.0)
0.2mol/L磷酸二氢钾溶液 | 50.0ml |
0.2mol/L氢氧化钠溶液 | 46.8ml |
水 | 至200ml |
4.磷酸盐缓冲液(pH6.0)
0.2mol/L磷酸二氢钾溶液 | 50.0ml |
0.2mol/L氢氧化钠溶液 | 5.7ml |
水 | 至200ml |
5.制霉菌素含量测定所用的试验菌:酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)ATCC2601
6.制霉菌素含量测定所用的培养基
胨 | 9.4g | 牛肉浸出粉 | 2.4g |
酵母浸出粉 | 4.7g | 氯化钠 | 10.0g |
葡萄糖 | 10.0g | 琼脂 | 23.5g |
水 | 1000ml | ||
调节pH值使灭菌后为pH6.1±0.1,分装,115℃灭菌30分钟。 |
培养条件 在28℃~32℃培养18~24小时。