有一个制剂产品标准，里面有一项是微生物限度，求高人根据标准写出微生物方法学验证方案和具体的试验过程。具体要求同CTD申报资料的P5模块。制剂产品标准如下：微生物限度 取本品10g，加入无菌聚山梨酯80（预加热至40℃～45℃）5g，混匀，再加入冲洗液（预加热至40℃～45℃）85ml，混匀，作为供试品溶液（1），量取供试品溶液（1）10ml，加中和剂90ml，混匀，静置20分钟，作为供试品溶液（2）。需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数 用冲洗液（预加热至40℃～45℃）50ml冲洗滤膜，取供试品溶液（2）10ml（相当于供试品0.1g），薄膜过滤，用冲洗液（预加热至40℃～45℃）冲洗滤膜3次，每次100ml。分别取以上滤膜，照非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法（现行中国兽药典附录1105）检查。金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌 用冲洗液（预加热至40℃～45℃）50ml冲洗滤膜，取供试品溶液（1）10ml（相当于供试品1g），薄膜过滤，用冲洗液（预加热至40℃～45℃）冲洗滤膜3次，每次100ml。分别取以上滤膜，照非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法（现行中国兽药典附录1106）检查。每1g供试品中需氧菌总数不得过102cfu，霉菌和酵母菌总数不得过101cfu，不得检出金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌。附注：1.冲洗液磷酸二氢钾3.60g磷酸氢二钠二水合物7.20g氯化钠4.30g肉蛋白胨或酪蛋白胨1.00g聚山梨酯8010.00g水1000mlpH：7.0±0.2，25℃2.中和剂聚山梨酯8030.00g蛋黄卵磷脂3.00g盐酸组氨酸1.00g肉蛋白胨或酪蛋白胨1.00g氯化钠4.30g磷酸二氢钾3.60g磷酸氢二钠二水合物7.20g水1000mlpH：7.0±0.2，25℃3.磷酸盐缓冲液（pH8.0）0.2mol/L磷酸二氢钾溶液50.0ml0.2mol/L氢氧化钠溶液46.8ml水至200ml4.磷酸盐缓冲液（pH6.0）0.2mol/L磷酸二氢钾溶液50.0ml0.2mol/L氢氧化钠溶液5.7ml水至200ml5.制霉菌素含量测定所用的试验菌：酿酒酵母（saccharomyces cerevisiae）ATCC26016.制霉菌素含量测定所用的培养基胨9.4g牛肉浸出粉2.4g酵母浸出粉4.7g氯化钠10.0g葡萄糖10.0g琼脂23.5g水1000ml调节pH值使灭菌后为pH6.1±0.1，分装，115℃灭菌30分钟。培养条件 在28℃～32℃培养18～24小时。
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