有偿求微生物方法学验证方案和试验过程

有一个制剂产品标准，里面有一项是微生物限度，求高人根据标准写出微生物方法学验证方案和具体的试验过程。具体要求同CTD申报资料的P5模块。

制剂产品标准如下：

微生物限度  取本品10g，加入无菌聚山梨酯80（预加热至40℃～45℃）5g，混匀，再加入冲洗液（预加热至40℃～45℃）85ml，混匀，作为供试品溶液（1），量取供试品溶液（1）10ml，加中和剂90ml，混匀，静置20分钟，作为供试品溶液（2）。

需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数  用冲洗液（预加热至40℃～45℃）50ml冲洗滤膜，取供试品溶液（2）10ml（相当于供试品0.1g），薄膜过滤，用冲洗液（预加热至40℃～45℃）冲洗滤膜3次，每次100ml。分别取以上滤膜，照非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法（现行中国兽药典附录1105）检查。

金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌  用冲洗液（预加热至40℃～45℃）50ml冲洗滤膜，取供试品溶液（1）10ml（相当于供试品1g），薄膜过滤，用冲洗液（预加热至40℃～45℃）冲洗滤膜3次，每次100ml。分别取以上滤膜，照非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法（现行中国兽药典附录1106）检查。

每1g供试品中需氧菌总数不得过10²cfu，霉菌和酵母菌总数不得过10¹cfu，不得检出金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌。

附注：

1.冲洗液

2.中和剂

3.磷酸盐缓冲液（pH8.0）

4.磷酸盐缓冲液（pH6.0）

5.制霉菌素含量测定所用的试验菌：酿酒酵母（saccharomyces cerevisiae）ATCC2601

6.制霉菌素含量测定所用的培养基

培养条件   在28℃～32℃培养18～24小时。